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產(chǎn)品中心細(xì)胞培養(yǎng)ipsc培養(yǎng)基套裝友康iPSC無血清培養(yǎng)基套裝NC0401+NC0401.S
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品分類
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化學(xué)成分明確的iPSC無血清培養(yǎng)基，產(chǎn)品性能良好，細(xì)胞連續(xù)穩(wěn)定傳代，仍能保持其干性。
本產(chǎn)品用于培養(yǎng)經(jīng)過重編程誘導(dǎo)成的人多能干細(xì)胞(hiPSC)，并能夠連續(xù)傳代，保持其干性。成分明確，培養(yǎng)時不需添加任何額外成分（Y27632除外）。支持隔天補液。本培養(yǎng)基用于培養(yǎng)經(jīng)過重編程誘導(dǎo)成的人多能干細(xì)胞,并能夠連續(xù)傳代,保持其干性。細(xì)胞株描述:細(xì)胞購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫 (SCSP-1301 ) ,細(xì)胞代數(shù)為17代。
【產(chǎn)品優(yōu)勢】
1、化學(xué)成分明確的無血清培養(yǎng)基，用于hiPSC的體外擴增和長期培養(yǎng)；
2、配方經(jīng)過科學(xué)優(yōu)化，采用熱穩(wěn)定型細(xì)胞因子，緩沖體系更強；
3、支持隔天換液，可實現(xiàn)單細(xì)胞傳代，操作簡便，適用性強；
4、擴增性能更優(yōu)，支持超過50代的無滋養(yǎng)層培養(yǎng)，細(xì)胞核型無異常、無明顯分化現(xiàn)象。
【產(chǎn)品性能】
1.復(fù)蘇后轉(zhuǎn)移至此培養(yǎng)基中能夠連續(xù)穩(wěn)定傳 35代以上。
2.細(xì)胞傳代時間為3~ 5 天。
3.細(xì)胞表型:TRA-1-60290%, OCT42 95%。
4.細(xì)胞形態(tài):
形狀: 圓形或橢圓形, 邊界清晰, 邊緣光滑
厚度:集落呈扁平但略微隆起的二維結(jié)構(gòu), 中央稍厚。
外觀:在顯微鏡下呈 "鵝卵石 "狀, 細(xì)胞密集排列。
【產(chǎn)品使用所需要的試劑耗材】
產(chǎn)品名稱 | 品牌貨號 |
ipsc無血清培養(yǎng)基套裝 | YOCON/NC0401、NC0401.S |
stemproTMAccutaseTM細(xì)胞解離試劑 | Thermo/A11 10501 |
ip sc無血清凍存液 | YO CON/NC0603 |
DPBS(不含鈣鎂離子 ) | YOCON/BS0402 |
DMEM/F12 | YO CON/NC0406 |
Y27632 | MCE/HY-10583 |
Mat riGel | corning/354277 |
另需細(xì)胞培養(yǎng)板 /瓶 /皿, 15mL離心管和移液管等細(xì)胞培養(yǎng)耗材。 | |
2.試劑準(zhǔn)備
培養(yǎng)基配制:
溫下預(yù)溫 20~30min, 時間不宜過長, 切勿強光或紫外照射。
ipsc完培養(yǎng)基2~8℃可避光保存半個月, 由于蛋白在溶液中易降解, 所以最好 1 周內(nèi)用完?？蒲行×?、多次使用時,建議添加劑融化后立即分裝(添加劑出廠后僅允許凍融一次) 。完培養(yǎng)基配制完成后, 減少預(yù)溫次數(shù),根據(jù)需求可提前進行分裝。
Matrigel工作液配制和包被:
根據(jù)康寧的批次報告進行分裝。分裝后的小包裝可在 -80℃下最多儲存6個月。
取出一份基質(zhì)膠加入到36 mL的DMEM/F12 中, 包被四個 6 孔培養(yǎng)板 (1.5mL/孔) 。
(1) 將一份基質(zhì)膠從 -80℃取出, 在4℃冰箱中的冰上解凍, 直到成為液體 (同時預(yù)冷移液管或槍頭) 。
(2)將裝有 36mL的 DMEM/F12培養(yǎng)基的離心管插入冰中 (包被過程中保持低溫,避免因局部溫度過高凝固而影響包被質(zhì)量) 。
(3) 吸取 1mL預(yù)冷 DMEM/F12 加入含有基質(zhì)膠的小管中, 移液槍吹打混勻 20 次后, 吸入到預(yù)冷培養(yǎng)基 (50mL離心管)中,移液管吹打混勻 20次。
(4)立即用稀釋后的基質(zhì)膠溶液包被 6 孔板。
(5)包被后, 需在 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置 1小時, 可立即使用。如果不立即使用,將6孔板用封口膜封好后,放入4℃冰箱中最多儲存7天。如果基質(zhì)膠溶液并未全覆蓋表面, 則無法實現(xiàn)最佳的 IPSC培養(yǎng); 因此, 不建議使用含有溶液已蒸發(fā)區(qū)域的培養(yǎng)板。
(6) 使用時, 輕輕地將培養(yǎng)板向一個角落傾斜, 吸取包被液上清, 注意不要碰到底面包被好的基質(zhì)膠。 立即加入培養(yǎng)基和細(xì)胞。如果已將培養(yǎng)板在4℃下儲存,在使用之前, 還需將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱 (37℃ )下放置 30~60分鐘。
配制Y27632溶液:
Y27632粉末溶解, 配成濃度為10mM的儲存液。分裝后冷凍于 -20℃, 6個月 內(nèi)使用。
Y27632提高復(fù)蘇和傳代后的存活率和克隆形成率, 所以只在復(fù)蘇步驟和傳代步驟添加, 推薦添加的終濃度為10M,換液后不再添加且換液時長不宜超過24小時。
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